Semana 12 1/10

Como ya les habiamos contado la semana pasada, hoy hicimos una PCR. En realidad lo que hicimos fue poner a punto una PCR para Petri, uno de los chicos del laboratorio.
Lo que hicimos fue programar en la cicladora un gradiente de temperatura para ver a cual se pegaban mejor los primers(annealing, 58ºC->68ºC) y 3 distintas concentraciones de Magnesio(50mM, 100mM y 150mM , para ver cual era la que mejor funcinaba y depsues mediante una electroforesis en gel de agarosa 2% ver cual era la combinacion justa. Los wells de la misma columna recibieron la misma temperatura de annealing y los wells de la misma fila tienen la misma concentracion de magnesio.
Como los productos de la PCR diferian en tan solo 20pb, hicimos un gel 2% y no 1% porque tiene mayor poder de resolucion, esto quiere decir que puede separa mejor debido a que el tamaño de los poros es mas chico.

Lo que decidimos fue que la que combiene es la que recibio 68ºC y tenia 50mM de Mg, dado que al haber recivido mayor temperatura aumento la especificidad del pegado de primeres, con lo cual se produce menos "basura" y como tenia 50mM la actividad de la Taq fue mas especifica.

Hasta la semana que viene!