Tecnica de PCR

PCR:

La técnica de PCR-reacción en cadena de la polimerasa-es una de las técnicas más utilizada en biología molecular, que sirve para aumentar la cantidad de moléculas de ADN de una secuencia específica. Se basa en utilizar la reacción de polimerización de la ADNpol, presente en todos los seres vivos. Es un procedimiento sumamente fácil y practico, hasta existe maquinas hacen esta reacción que consta de los siguientes pasos:

1. Poner en un tubo el ADN de interés, dNTPs, Primers, taqPolimerasa (T° optima= 72°C), Mg⁺² y buffer^.
2. llevar a 95°C, 1’.
3. llevar a 60°C, 1’.
4. llevar a 72°C, 2’.
5. repetir, 2-3-4, las veces deseadas, generalmente 1h.

Lo que sucede es que a 95°C el ADN se desnaturaliza, los puentes de hidrogeno que une las dos hebras se rompen y quedan las hebras por separada, dejando las bases nitrogenadas desapareadas. A 60°C los primers se pueden unir a al ADN. A 72°C la Taq Polimerasa actúa, polimerizando el ADN obteniendo copias. Sirve para amplificar una secuencia específica, que es la que esta encerrada entre los primers. Es tan efectiva esta técnica de amplificación que al finalizar los ciclos la cantidad de moléculas es:

x.2ⁿ

siendo x el numero de moléculas iniciales, y n los ciclos. Suponiendo que partimos de 1 sola moléculas y hacemos 30 ciclos, aproximadamente 1.30 hs, al final obtenemos 1.073.741.824 moléculas de ADN

Puede ser o no radioactiva, según los que se quiere analizar. Si se quiere conocer cual era la cantidad inicial que había de ese fragmento se la hace radioactiva, para poder medir la cantidad de radioactividad, que es proporcional a la cantidad de ADN, mas radioactividad implica mayor cantidad de ADN. También sirve si es radioactiva para poder tener una cuantificación mas precisa.

aca les dejo un video que esta bueno. Eesta en ingles pero es facil de entender